Plasmide CRISPR d'Activation (h) GFRP: sc-405353-ACT

Le gène humain **GCHFR** code la protéine régulatrice par rétrocontrôle de la GTP cyclohydrolase I (**GFRP**), un modulateur allostérique clé de la GTP cyclohydrolase I (**GCH1**) qui ajuste la biosynthèse *de novo* de la tétrahydrobioptérine (**BH4**). En intégrant les signaux provenant de la BH4 et de la phénylalanine, GFRP contribue à maintenir l’homéostasie de ce cofacteur, soutenant l’hydroxylation des acides aminés aromatiques et l’activité des NO synthases, ce qui influence la production de neurotransmetteurs et des voies de signalisation sensibles à l’état rédox. Cette régulation relie ainsi **GCHFR** au contrôle métabolique de processus vasculaires et immunitaires dépendants du NO, ainsi qu’aux voies de biosynthèse des monoamines dans le système nerveux. Une disponibilité dérégulée de la BH4 et une altération du contrôle **GCH1–GFRP** ont été associées à des phénotypes pertinents pour la signalisation de la douleur, la dysfonction endothéliale et les déséquilibres des neurotransmetteurs, faisant de **GCHFR** un point d’entrée utile pour des études ciblées sur des voies biologiques.

GFRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCHFR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GFRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCHFR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCHFR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GFRP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCHFR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GFRP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GFRP dans les cellules tumorales présentant une expression de GCHFR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.