Gelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401005

概要

GSNはゲルゾリン（gelsolin）をコードしており、ゲルゾリンはカルシウムによって制御されるアクチン結合タンパク質です。アクチンフィラメントを切断し、末端をキャップすることで、細胞骨格のリモデリングや細胞の力学特性を調節します。アクチン重合ダイナミクスの調整を通じて、ゲルゾリンは細胞運動、接着、エンドサイトーシス、アポトーシスなどの過程に関与し、さらにストレス応答や膜輸送を制御するシグナル伝達経路とも連携します。GSNの発現変動やゲルゾリン活性の変化は、組織リモデリングや炎症性微小環境の変化と関連づけられており、がん細胞の浸潤、神経変性、心血管領域の研究でしばしば扱われます。アクチンフィラメントのターンオーバーを制御する主要因子として、ゲルゾリンは、多様なヒト細胞モデルにおけるアクチン依存性表現型を解析するための扱いやすい重要な標的となります。

Gelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGSN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GSN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GSNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Gelsolinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Gelsolinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GSN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Gelsolinの機能に不可欠なGSNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GSNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Gelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGelsolin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GSN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Gelsolin HDRプラスミド（h）および Gelsolin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGSNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGSN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。