GATA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400396

概要

GATA1は、WGATARモチーフに結合して造血過程における系譜特異的な遺伝子発現を制御する亜鉛フィンガー型転写因子GATA-1をコードする。GATA-1は赤血球系の成熟および巨核球の分化に必須であり、FOG1（ZFPM1）などの補因子との協調やクロマチンリモデリングの調節を通じて、ヘモグロビン化、細胞周期からの離脱、終末分化を司るプログラムを統合的に制御する。さらにGATA-1の活性は、エリスロポエチン／JAK–STATシグナル伝達やより広範な転写ネットワークと連携し、赤血球および血小板関連遺伝子の発現を形成する。GATA1の制御異常や変異は、先天性の血球減少症や、赤血球／巨核球系プログラムの異常を伴う骨髄系白血病など、血液細胞の発生・分化に関わる疾患と強く関連する。

GATA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGATA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GATA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GATA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GATA-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GATA-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GATA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GATA-1の機能に不可欠なGATA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GATA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GATA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGATA-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GATA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GATA-1 HDRプラスミド（h）および GATA-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGATA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGATA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。