Plasmide CRISPR d'Activation (h) gasdermin: sc-410658-ACT

Le gène humain **GSDMA** code la gasdermine A, un effecteur formateur de pores de la mort cellulaire régulée, qui contribue à la biologie de la barrière épithéliale et à la signalisation inflammatoire. Les gasdermines peuvent être activées par un clivage protéolytique qui dévoile un domaine N‑terminal s’oligomérisant dans les membranes, favorisant des programmes de mort lytique et la libération de médiateurs pro‑inflammatoires. L’expression et la régulation de **GSDMA** sont liées aux voies de réponse au stress dans les épithéliums stratifiés, avec des associations rapportées à l’asthme, à des phénotypes cutanés inflammatoires et à des loci de susceptibilité dans des maladies à médiation immunitaire. Par conséquent, **GSDMA** est fréquemment étudié dans le contexte de l’homéostasie épithéliale, des réponses immunitaires innées et du remodelage tissulaire induit par la mort cellulaire.

gasdermin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSDMA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

gasdermin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSDMA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSDMA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de gasdermin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSDMA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de gasdermin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie gasdermin dans les cellules tumorales présentant une expression de GSDMA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.