GAP-43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420484

Visão geral

Gap43 codifica a proteína 43 associada ao crescimento (GAP-43), uma fosfoproteína associada à membrana e enriquecida em neurônios, que se localiza nos cones de crescimento e nos terminais pré-sinápticos, onde regula a extensão de neuritos, a orientação axonal e a remodelação sináptica. A função da GAP-43 está intimamente ligada à dinâmica do citoesqueleto de actina e à sinalização dependente de cálcio, incluindo a fosforilação mediada por PKC, que modula as interações com a membrana e processos associados à plasticidade. Em camundongos, a expressão de Gap43 aumenta durante o desenvolvimento e após lesão neural, tornando-a um marcador molecular amplamente utilizado de crescimento axonal e de respostas regenerativas. A remodelação desregulada de circuitos dependente de GAP-43 tem sido associada a conectividade sináptica alterada em modelos de transtornos do neurodesenvolvimento e de doenças neurodegenerativas, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos da função de redes neuronais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Gap43 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Gap43, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Gap43 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GAP-43.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Gap43 para a investigação da sinalização de GAP-43, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Gap43 críticos para a função GAP-43
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Gap43 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GAP-43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GAP-43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Gap43. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GAP-43 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GAP-43 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Gap43 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Gap43 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.