GAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400632

概要

GAP43は、軸索伸長、進行方向の制御、シナプス再構築を支えるタンパク質である成長関連タンパク質43（GAP-43）をコードしています。GAP-43は神経細胞の成長円錐やシナプス前終末に豊富に存在する膜関連リン酸化タンパク質で、カルモジュリンと相互作用し、PKC（プロテインキナーゼC）の主要な基質としても知られています。これにより、カルシウムシグナルと、リン酸化に依存した細胞骨格動態および小胞輸送の制御が結び付けられます。神経突起の伸長や可塑性に関連する転写プログラムに関与することから、GAP-43は神経系における再生状態や発達状態のマーカーとして広く用いられています。シナプス結合性や軸索維持が損なわれる神経発達・神経変性過程の文脈において、GAP-43の発現やリン酸化の変化が検討されてきました。

GAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGAP43遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GAP43内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GAP43のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GAP-43タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GAP-43シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GAP43欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GAP-43の機能に不可欠なGAP43エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GAP43ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGAP-43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GAP43遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GAP-43 HDRプラスミド（h）および GAP-43 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGAP43ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGAP43標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。