GALK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405217

概要

GALK1はガラクトキナーゼ1をコードしており、α-D-ガラクトースをガラクトース-1-リン酸へリン酸化する細胞質酵素である。これにより、ガラクトース利用のためのルロワール経路への流入が開始される。ガラクトースが解糖系および糖鎖（グリココンジュゲート）生合成経路へ入る段階を制御することで、GALK1活性は細胞のエネルギー代謝と糖鎖恒常性の維持に寄与する。ガラクトース代謝の破綻は先天性代謝異常と関連し、ルロワール経路機能の変化は、さまざまな細胞環境において酸化ストレス応答や代謝産物の毒性に影響し得る。そのためGALK1は、糖質代謝、代謝リプログラミング、ならびにタンパク質や脂質の糖鎖付加（グリコシル化）への下流影響を研究するうえで重要である。

GALK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGALK1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GALK1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GALK1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GALK1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GALK1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GALK1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GALK1の機能に不可欠なGALK1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GALK1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GALK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGALK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GALK1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GALK1 HDRプラスミド（h）および GALK1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGALK1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGALK1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。