Plasmide Double Nickase (h) GALE: sc-408127-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GALE correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GALE Double Nickase (h) et le plasmide GALE Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GALE. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GALE Antibody (C-4): sc-390407
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GALE | sc-408127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GALE | sc-408127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALE code l’UDP-galactose-4-épimérase, une enzyme cytosolique qui interconvertit de façon réversible l’UDP-galactose et l’UDP-glucose, et catalyse également l’épimérisation UDP-GalNAc/UDP-GlcNAc requise pour le métabolisme des amino-sucres. Par ces réactions, GALE soutient la voie de Leloir d’utilisation du galactose et fournit des substrats de sucres nucléotidiques pour la glycosylation, influençant la biosynthèse des protéoglycanes et des glycoprotéines dans la voie sécrétoire. Une perturbation de l’activité de GALE dérègle l’homéostasie glucidique cellulaire et peut modifier la composition des glycannes, avec des effets en aval sur le repliement, le trafic et la signalisation des protéines. Chez l’humain, un dysfonctionnement de GALE est associé à certaines formes de galactosémie, ce qui en fait un gène utile pour étudier, dans des systèmes modèles, les réponses au stress métabolique et les phénotypes liés à la glycosylation.
GALE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GALE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GALE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GALE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GALE.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.