GABP-β1/2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404040-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GABP-β1/2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GABP-β1/2 Double-Nickase-Plasmid (h) und GABP-β1/2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GABPB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GABP-β1/2: sc-271571
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GABP-β1/2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABP-β1/2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das GA-bindende Protein, Untereinheit Beta 1 (GABPB1), kodiert den β1/β2-Partner, der mit GABPA ein Heterodimer bildet und so den ETS-Familien-Transkriptionsfaktor GABP erzeugt. Dieser bindet an GA-reiche Promotorelemente und koordiniert Genexpressionsprogramme, die die Zellzyklusprogression, die mitochondriale Biogenese und die Proteostase steuern. GABP-Komplexe regulieren nukleär kodierte mitochondriale Gene sowie die Kapazität der oxidativen Phosphorylierung und tragen zur transkriptionellen Kontrolle der Telomererhaltung bei, indem sie den TERT-Promotor regulieren. Über diese Funktionen ist GABPB1 in Signalwege eingebunden, die den zellulären Stoffwechsel, die Anpassung an Stress und linienspezifische Transkriptionsnetzwerke steuern. Eine Fehlregulation der GABP-Signalgebung und eine veränderte, von GABPB1 abhängige transkriptionelle Output-Leistung wurden in Zusammenhängen der Tumorbiologie sowie bei Erkrankungen mit Defekten der mitochondrialen oder transkriptionellen Kontrolle beschrieben, was mechanistische Studien zur Genregulation und zellulären Fitness unterstützt.
GABP-β1/2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GABPB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GABPB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GABPB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GABPB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.