Plásmido CRISPR de Activación (h) GABA_B R2: sc-402517-ACT

GABBR2 codifica la subunidad 2 del receptor GABA\(_B\) (GABA\(_B\) R2), un componente esencial de los receptores metabotrópicos GABA\(_B\) funcionales, que forman heterodímeros con GABBR1 para mediar una neurotransmisión inhibitoria lenta en el sistema nervioso central. Tras la unión del ligando, estos receptores se acoplan a proteínas Gi/o para inhibir la adenilil ciclasa, reducir la señalización cAMP/PKA, modular las vías MAPK, abrir canales de potasio GIRK y suprimir la actividad de los canales de calcio dependientes de voltaje, dando forma en conjunto a la excitabilidad neuronal y a la plasticidad sináptica. La señalización GABA\(_B\) influye en las oscilaciones de red, la liberación de neurotransmisores y el desarrollo neuronal, vinculando la regulación del receptor con múltiples procesos neurobiológicos. La alteración de la expresión o la función de GABBR2 se ha asociado con fenotipos neurológicos y neuropsiquiátricos, incluida la susceptibilidad a convulsiones y un desequilibrio excitatorio–inhibitorio, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos en modelos de enfermedad.

GABAB R2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GABBR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABAB R2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GABBR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GABBR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABAB R2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GABBR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABAB R2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABAB R2 en células tumorales con expresión de GABBR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.