Plásmido Doble Nickase (h) GABA_A Rδ: sc-401954-NIC

GABRD codifica la subunidad δ del receptor humano GABA\_A (GABA\_A Rδ), un canal de cloruro inhibitorio activado por ligando que contribuye de manera destacada a los receptores extrasinápticos que median la inhibición tónica en las neuronas. Al modular la excitabilidad de la membrana y la integración sináptica, los receptores GABA\_A que contienen δ influyen en las oscilaciones de red y en el equilibrio de la neurotransmisión dentro de las vías de señalización gabaérgicas. La expresión de GABRD y la composición del receptor están estrictamente reguladas durante el desarrollo y en respuesta a los neuroesteroides, lo que vincula esta subunidad con la plasticidad dependiente de la actividad. Las alteraciones en la función o la expresión de la subunidad δ se han asociado con fenotipos neurológicos y neuropsiquiátricos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la señalización inhibitoria y de la disfunción de circuitos.

GABAA Rδ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GABRD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GABRD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GABRD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GABRD alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.