Plásmido CRISPR de Activación (h) GABA_A Rβ2: sc-405041-ACT

GABRB2 codifica la subunidad β2 del receptor humano de ácido γ-aminobutírico tipo A (GABA\(_A\)), un componente central de los canales de cloruro pentaméricos activados por ligando que median la transmisión sináptica inhibitoria rápida en el sistema nervioso central. Los receptores GABA\(_A\) que contienen β2 regulan la excitabilidad neuronal al acoplar la unión del neurotransmisor con la entrada de cloruro, moldeando las oscilaciones de red y la plasticidad sináptica. Esta subunidad del receptor participa en la organización de las sinapsis GABAérgicas, la señalización postsináptica y el refinamiento de circuitos dependiente de la actividad. La alteración de la expresión de GABRB2 o de la composición del receptor se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos del desequilibrio de la señalización inhibitoria.

GABAA Rβ2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GABRB2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABAA Rβ2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GABRB2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GABRB2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABAA Rβ2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GABRB2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABAA Rβ2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABAA Rβ2 en células tumorales con expresión de GABRB2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.