Plasmide Double Nickase (h) GABA_A Rα5: sc-402696-NIC

GABRA5 code la sous-unité α5 du récepteur humain GABA\_A, un canal chlorure activé par ligand qui assure la neurotransmission inhibitrice dans le système nerveux central. Les récepteurs contenant α5 sont enrichis aux sites extrasynaptiques et contribuent à l’inhibition tonique, modulant l’excitabilité neuronale, l’intégration synaptique et la plasticité via l’homéostasie du chlorure et la signalisation GABAergique. Cette sous-unité participe à la régulation des réseaux dépendante de l’activité et interagit fonctionnellement avec des voies impliquées dans les circuits de l’apprentissage et de la mémoire. Une dérégulation de la signalisation des récepteurs GABA\_A contenant α5 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques du fonctionnement des circuits inhibiteurs.

GABAA Rα5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABRA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABRA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABRA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABRA5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.