Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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G9a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430994
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- G9a Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico G9a, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: G9a Antibody (C-9): sc-515726
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
G9a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-430994 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino Ehmt2 codifica la metiltransferasi istonica della lisina G9a, uno dei principali “writer” della mono- e dimetilazione di H3K9, che contribuisce a stabilire stati di cromatina repressivi nella eucromatina. G9a coordina programmi di silenziamento trascrizionale coinvolti nello sviluppo embrionale, nella specificazione di linea e nel mantenimento dell’identità cellulare, collaborando con regolatori della cromatina quali GLP (EHMT1) e fattori associati all’eterocromatina. Attraverso i suoi effetti sull’accessibilità della cromatina e sull’espressione genica, EHMT2 influenza le risposte al danno al DNA, la tempistica della replicazione e la stabilità epigenetica. L’attività disregolata di G9a e i pattern di H3K9me2 sono ampiamente studiati nel contesto della biologia tumorale, dei fenotipi neuroevolutivi e della regolazione dei geni infiammatori, rendendo Ehmt2 un nodo chiave per la ricerca incentrata sull’epigenetica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO G9a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ehmt2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ehmt2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ehmt2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina G9a.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ehmt2 per lo studio della segnalazione di G9a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ehmt2 critici per la funzione di G9a
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ehmt2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal G9a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal G9a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ehmt2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal G9a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR G9a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ehmt2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ehmt2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.