G9a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402484-ACT

EHMT2は、ヒトのヒストンリジンメチルトランスフェラーゼG9aをコードしており、可逆的（ファカルタティブ）ヘテロクロマチン形成と転写抑制を促進するH3K9me1/2マークの主要な「書き込み（writer）」酵素です。G9aはGLP、HP1タンパク質群、ならびにDNAメチル化機構と協調してクロマチンアクセシビリティを調節し、発生および分化の過程において系譜特異的な遺伝子発現プログラムを安定化させます。細胞周期制御、DNA損傷応答、さらに代謝および炎症に関わる転写ネットワークの制御を通じて、EHMT2はエピジェネティック恒常性に関連する複数のシグナル伝達経路に影響を及ぼします。G9a活性の破綻やH3K9メチル化パターンの変化は、腫瘍生物学、神経発達表現型、免疫関連の転写リモデリングと関連づけられており、機序に基づく疾患モデル化における重要性を裏づけています。

G9a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EHMT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

G9a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EHMT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEHMT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性G9aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEHMT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるG9a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEHMT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるG9a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。