G3BP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424175-ACT

A proteína murina G3BP1 (G3bp1) é uma proteína de ligação a RNA que atua como um nucleador central de grânulos de estresse e como coordenadora da triagem de mRNA durante o estresse celular. Ela integra sinais de vias como o controle translacional dependente de eIF2α e se conecta a respostas imunes inatas e antivirais por meio da regulação do metabolismo de RNA e da montagem de ribonucleoproteínas. A G3BP1 influencia a sobrevivência, a proliferação e a apoptose celulares ao modular a estabilidade e a tradução de transcritos envolvidos em programas de crescimento e inflamatórios. A desregulação da atividade de G3BP1 e da dinâmica dos grânulos de estresse tem sido associada à neurodegeneração, à patogênese viral e a alterações na regulação pós-transcricional relacionadas ao câncer, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de biologia do RNA.

G3BP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de G3bp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G3BP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus G3bp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição G3bp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G3BP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus G3bp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G3BP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G3BP1 em células tumorais com expressão de G3bp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.