Plasmide CRISPR d'Activation (m) G3BP1: sc-424175-ACT

La protéine murine G3BP1 (G3bp1) est une protéine liant l’ARN qui agit comme nucléateur central des granules de stress et comme coordinatrice du tri des ARNm lors du stress cellulaire. Elle intègre des signaux provenant de voies telles que le contrôle traductionnel dépendant d’eIF2α et s’interface avec les réponses immunitaires innées et antivirales via la régulation du métabolisme de l’ARN et de l’assemblage des ribonucléoprotéines. G3BP1 influence la survie, la prolifération et l’apoptose cellulaires en modulant la stabilité et la traduction de transcrits impliqués dans des programmes de croissance et d’inflammation. Une activité dérégulée de G3BP1 et des altérations de la dynamique des granules de stress ont été associées à la neurodégénérescence, à la pathogenèse virale et à des modifications de la régulation post‑transcriptionnelle liées au cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie de l’ARN.

G3BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de G3bp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G3BP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus G3bp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription G3bp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G3BP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus G3bp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G3BP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G3BP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de G3bp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.