G2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401866

概要

GPR132は、免疫調節に関与するGタンパク質共役受容体G2Aをコードしており、白血球の遊走や炎症性刺激に対する応答に関与するセンサーとして示唆されています。G2Aは、細胞外の酸性化や、酸化脂肪酸誘導体などの生理活性脂質によって活性化され得ることから、組織ストレスを、三量体Gタンパク質を介したGPCRシグナル伝達および下流のMAPK経路やカルシウム依存性経路へと結び付けます。免疫細胞では、G2Aシグナルは走化性、活性化状態、ならびに炎症性微小環境を形成するサイトカイン関連プログラムに影響を及ぼします。GPR132の発現やシグナル伝達の破綻は、慢性炎症や腫瘍―免疫相互作用との関連が報告されており、免疫学およびがん生物学における機序解明研究の観点から重要です。

G2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGPR132遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GPR132内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GPR132のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、G2Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、G2Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GPR132欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• G2Aの機能に不可欠なGPR132エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GPR132ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• G2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびG2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GPR132遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  G2A HDRプラスミド（h）および G2A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGPR132ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGPR132標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。