FXR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402570-ACT

FXR1 (fragiles-X-Syndrom‑assoziiertes Protein 1) ist ein RNA-bindendes Protein, das die posttranskriptionelle Genexpression durch die Kontrolle der mRNA‑Stabilität, -Lokalisierung und -Translation reguliert. Es ist mit Ribonukleoprotein-Komplexen und Stressgranula assoziiert und verknüpft Signalreize mit dem RNA‑Stoffwechsel, um die Proteomzusammensetzung während Proliferation, Differenzierung und Stressantworten zu steuern. FXR1 trägt zur Organisation des Zytoskeletts und zur Kontrolle des Zellzyklus bei, indem es die Translation von für Signalwege relevanten Transkripten moduliert und so die RNA‑Regulation mit Prozessen wie Migration und Überleben verbindet. Eine veränderte FXR1‑Expression oder -Aktivität wurde in Zusammenhängen der Tumorbiologie sowie bei neuromuskulären und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen beschrieben, was FXR1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu RNA‑Regulationsnetzwerken macht.

FXR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FXR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FXR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FXR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FXR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FXR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FXR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FXR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FXR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FXR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.