Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) fumarate hydratase: sc-401660-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) fumarate hydratase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide fumarate hydratase Double Nickase (h) et le plasmide fumarate hydratase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: fumarate hydratase Antibody (H-6): sc-393992
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) fumarate hydratase | sc-401660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) fumarate hydratase | sc-401660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **FH** code la fumarate hydratase (fumarase), une enzyme clé du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle TCA) qui catalyse l’hydratation réversible du fumarate en L‑malate, soutenant le métabolisme oxydatif et l’équilibre rédox cellulaire. En contrôlant les niveaux de fumarate, FH influence la bioénergétique mitochondriale et la signalisation dépendante des métabolites, notamment des voies liées aux réponses à l’hypoxie et à la régulation épigénétique. Une altération de la fonction de FH est associée à une accumulation de fumarate et à un vaste remodelage métabolique susceptible de modifier la gestion du stress oxydatif et les programmes transcriptionnels. Ces propriétés font de FH un nœud fréquemment utilisé pour étudier le métabolisme mitochondrial, la biologie des oncométabolites et le contrôle métabolique de l’état cellulaire.
fumarate hydratase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.