FUCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405221

概要

FUCA2はα-L-フコシダーゼ2をコードしており、N結合型／O結合型糖鎖複合体や糖脂質の末端フコース残基を加水分解する、分泌型のリソソーム系グリコシダーゼです。これにより糖鎖の分解（カタボリズム）とリモデリングに寄与します。FUCA2は、細胞表面および細胞外マトリックス（ECM）タンパク質のフコシル化状態を調節することで、受容体のターンオーバー、細胞間接着、免疫関連の糖鎖シグナル伝達などの過程に影響を与え得ます。フコース代謝やフコシダーゼ活性の変化は、炎症応答の変動や腫瘍関連の糖鎖修飾パターンの変化と関連づけられており、FUCA2は糖鎖オミクス（グライコミクス）に駆動される表現型を解析する上で有用な標的（ノード）となります。機能解析では、FUCA2依存的な脱フコシル化が、細胞内輸送、リソソーム機能、ならびに糖タンパク質を介したシグナル伝達経路に与える影響に焦点が当てられることが一般的です。

FUCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFUCA2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FUCA2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FUCA2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FUCA2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FUCA2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FUCA2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FUCA2の機能に不可欠なFUCA2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FUCA2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FUCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFUCA2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FUCA2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FUCA2 HDRプラスミド（h）および FUCA2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFUCA2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFUCA2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。