Partículas Lentivirales de Activación (h) FRY: sc-404629-LAC

FRY (homólogo furry) codifica una proteína grande, evolutivamente conservada y de tipo andamiaje, implicada en la regulación de la polaridad celular, la organización del citoesqueleto y los programas morfogenéticos. Se ha relacionado con la señalización asociada a la vía Hippo y con la coordinación de eventos dependientes de fosforilación que influyen en la proliferación, la diferenciación y la arquitectura tisular. En células humanas, FRY contribuye al control de la dinámica de la actina y de la organización intracelular, procesos que con frecuencia se remodelan durante la transformación oncogénica y la progresión metastásica. Se han descrito alteraciones en la expresión de FRY o perturbaciones de redes centradas en FRY en estudios de biología tumoral y de fenotipos del desarrollo, lo que respalda su relevancia para el análisis de vías en modelos de enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral FRY (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de FRY en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FRY (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción FRY, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FRY. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo FRY y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.