FRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404629

概要

FRY（furry homolog）は、進化的に保存された大型の足場（スキャフォールド）タンパク質をコードしており、NDR/LATSファミリーのセリン／スレオニンキナーゼの下流で機能して、細胞極性、細胞骨格の構築、極性をもった小胞輸送を調節するシグナルを統合・調整します。これらの経路を介して、FRYは細胞形態形成、細胞移動、上皮組織の構築の制御に寄与し、これらは組織の発生や恒常性維持と密接に関連する過程です。FRYの機能異常は、増殖シグナルの破綻や極性異常と関連づけられており、これらはがん生物学や、細胞構築の障害を伴う他の疾患でしばしば問題となります。キナーゼを中心とするシグナル伝達ネットワークの調節因子として、FRYはHippo関連の制御機構、細胞骨格ダイナミクス、状況依存的なストレス応答の機序研究において注目されています。

FRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFRY遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FRY内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FRYのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FRYタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FRYシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FRY欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FRYの機能に不可欠なFRYエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FRYゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FRY遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FRY HDRプラスミド（h）および FRY HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFRYホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFRY標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。