Plasmide CRISPR d'Activation (h) FRS2: sc-400656-ACT

FRS2 (fibroblast growth factor receptor substrate 2) est une protéine adaptatrice proximale à la membrane qui couple les FGFR activés à des cascades de signalisation en aval, notamment les voies RAS–MAPK/ERK et PI3K–AKT. Grâce à son domaine PTB et à de multiples sites de phosphorylation sur tyrosine, FRS2 coordonne le recrutement de GRB2/SOS et de GAB1 afin de propager des signaux mitogènes et de survie qui modulent la prolifération, la différenciation et la migration. La signalisation dépendante de FRS2 est au cœur des programmes de développement et d’homéostasie tissulaire pilotés par les ligands FGF, et une activité aberrante de l’axe FGFR–FRS2 est impliquée dans la dérégulation des signaux de croissance en biologie du cancer. En tant que nœud de voie, FRS2 est fréquemment étudiée pour son rôle dans l’intégration des signaux des récepteurs à activité tyrosine kinase, la régulation par rétrocontrôle et le dialogue avec d’autres voies de facteurs de croissance.

FRS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FRS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FRS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FRS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FRS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FRS2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FRS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FRS2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FRS2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FRS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.