FRP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422899

概要

Sfrp4 は、分泌型フリズルド関連タンパク質4（FRP-4）をコードしています。FRP-4 は可溶性の Wnt シグナル調節因子であり、Wnt リガンドおよび／または Frizzled 受容体に結合して、β-カテニン依存性経路および非カノニカル経路の出力を調整します。マウス組織において FRP-4 は、発生パターニングや組織恒常性に重要な、細胞運命決定、増殖、細胞外マトリックスのリモデリング、分化プログラムの制御に寄与します。Sfrp4 の発現変化は、線維化、代謝組織のリモデリング、腫瘍生物学などの状況における Wnt 経路活性の破綻と関連づけられており、Wnt のトーン（シグナル強度）の変化が上皮—間葉相互作用や間質応答に影響し得ます。分泌性の経路制御因子として、Sfrp4 は、Wnt と TGF-β、炎症性シグナル、系譜規定に関わる転写プログラムを統合するシグナルクロストーク・ネットワークの研究でしばしば取り上げられます。

FRP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSfrp4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sfrp4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sfrp4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FRP-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FRP-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sfrp4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FRP-4の機能に不可欠なSfrp4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sfrp4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FRP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFRP-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sfrp4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FRP-4 HDRプラスミド（m）および FRP-4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSfrp4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSfrp4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。