frizzled-7 Double Nickase Plasmid (m): sc-420437-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das frizzled-7 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- frizzled-7 Double-Nickase-Plasmid (m) und frizzled-7 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Fzd7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
frizzled-7 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420437-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Fzd7 kodiert Frizzled-7, einen siebenfach transmembranären WNT-Rezeptor, der ligandenabhängige Signalübertragung sowohl über die kanonische β‑Catenin/TCF-vermittelte Transkription als auch über nicht-kanonische Signalwege der planaren Zellpolarität und die WNT/Ca²⁺-Kaskade koordiniert. Durch die Regulation von Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation, Polarität und Migration trägt Frizzled-7 zur embryonalen Musterbildung und zur Homöostase adulter Gewebe bei, einschließlich der Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen. Veränderte, Fzd7-vermittelte Signalgebung wurde mit der fehlregulierten WNT-Signalwegaktivität in Modellen von Onkogenese, Fibrose und entzündlichem Gewebeumbau in Verbindung gebracht, bei denen Verschiebungen im β‑Catenin-Output und in der Zytoskelettdynamik krankheitsrelevante Phänotypen beeinflussen können. Entsprechend wird Fzd7 häufig in Signalwegen untersucht, die die epitheliale Organisation, regenerative Antworten und nischenabhängige Signal-Crosstalk-Mechanismen steuern.
frizzled-7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Fzd7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Fzd7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Fzd7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Fzd7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.