Plásmido CRISPR de Activación (m) frizzled-7: sc-420437-ACT

El gen Fzd7 de ratón codifica frizzled-7, un receptor WNT de siete dominios transmembrana que acopla ligandos WNT extracelulares a cascadas de señalización intracelular que controlan la polaridad celular, la proliferación y la diferenciación. FZD7 participa tanto en la señalización WNT canónica dependiente de β-catenina como en las vías no canónicas de polaridad celular planar y WNT/Ca2+, influyendo en programas transcripcionales y en la dinámica del citoesqueleto. En tejidos embrionarios y adultos, frizzled-7 contribuye al mantenimiento de células madre y progenitoras, a las transiciones epitelio‑mesénquima y a la remodelación tisular. La desregulación de la señalización de Fzd7 se estudia con frecuencia en el contexto de una actividad aberrante de la vía WNT asociada a transformación oncogénica, fibrosis y microambientes inflamatorios, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la comunicación cruzada entre vías y del control de estados celulares.

frizzled-7 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fzd7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

frizzled-7 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fzd7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fzd7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de frizzled-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fzd7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de frizzled-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía frizzled-7 en células tumorales con expresión de Fzd7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.