FOXP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417494-ACT

FOXP2 kodiert einen Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor, der genregulatorische Programme koordiniert, die für neuronale Differenzierung, Neuritenauswuchs und synaptische Plastizität erforderlich sind, und dabei eine zentrale Rolle in kortiko-striatalen und zerebellären Schaltkreisen spielt, die an motorischem Lernen und Lautbildung beteiligt sind. Als DNA-bindender Regulator moduliert FOXP2 transkriptionelle Netzwerke, die den Chromatinzustand, die RNA-Verarbeitung und aktivitätsabhängige Signalwege steuern und so neurodevelopmentale Entwicklungsverläufe prägen. Genetische Variation oder eine veränderte FOXP2-Dosierung wurde mit Sprach- und Sprechstörungen sowie breiteren neurodevelopmentalen Phänotypen in Verbindung gebracht, was FOXP2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse der transkriptionellen Kontrolle neuronaler Schaltkreisfunktionen macht. Die experimentelle Modulation von FOXP2 unterstützt Studien zur Transkriptionsfaktor-getriebenen Festlegung von Zelllinien und zum nachgeschalteten Umbau von Signalwegen in humanen Zellmodellen.

FOXP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.