FOXF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403521

Panoramica

FOXF1 (forkhead box F1) codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead che controlla l’identità delle cellule mesenchimali e la segnalazione epitelio-mesenchimale durante lo sviluppo, con ruoli di rilievo nella morfogenesi del polmone e della vascolarizzazione polmonare. FOXF1 regola programmi genici legati all’organizzazione della matrice extracellulare, alla migrazione cellulare e alla differenziazione di muscolo liscio/periciti, integrandosi con vie di sviluppo quali la segnalazione Hedgehog, WNT/β-catenina e TGF-β. Alterazioni del dosaggio di FOXF1 o perturbazioni della sua regolazione sono state associate ad anomalie congenite polmonari e vascolari e sono state investigate in contesti di rimodellamento stromale aberrante e di interazioni tra tumore e microambiente. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, FOXF1 rappresenta un punto di accesso pratico per analizzare le reti trascrizionali che coordinano il patterning tissutale e la stabilità vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FOXF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FOXF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FOXF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FOXF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FOXF1 per lo studio della segnalazione di FOXF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FOXF1 critici per la funzione di FOXF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FOXF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FOXF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FOXF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FOXF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FOXF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FOXF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FOXF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FOXF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.