Plasmide CRISPR/Cas9 KO follistatin (m): sc-420417
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- follistatin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique follistatin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: follistatin Antibody (C-8): sc-365003
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO follistatin (m) | sc-420417 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin Fst code la follistatine, une glycoprotéine sécrétée qui se lie aux ligands de la superfamille du TGF-β et les neutralise, en particulier les activines et plusieurs BMP, modulant ainsi des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD2/3 et de SMAD1/5/8. En limitant la disponibilité des ligands, la follistatine façonne les décisions de destin cellulaire, la croissance tissulaire et les processus de réparation dans les systèmes musculaire, reproducteur et métabolique. L’activité de Fst influence la myogenèse et le remodelage associé à la fibrose, et le déséquilibre entre activine et follistatine est étudié dans des contextes de fonte musculaire, de signalisation inflammatoire et de phénotypes reproducteurs. En tant que régulateur extracellulaire clé de la signalisation des facteurs de croissance, Fst constitue un nœud accessible pour analyser les interactions entre voies et les boucles de rétroaction au sein des circuits développementaux et homéostatiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO follistatin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fst dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fst, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fst à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine follistatin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fst pour l'étude de la signalisation de follistatin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Fst essentiels à la fonction de follistatin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fst pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le follistatin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le follistatin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fst. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le follistatin plasmide HDR (m) et le follistatin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fst pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fst définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.