folliculin Double Nickase Plasmid (h): sc-403316-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das folliculin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- folliculin Double-Nickase-Plasmid (h) und folliculin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FLCN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: folliculin: sc-271558
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
folliculin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403316-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
folliculin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403316-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLCN kodiert Folliculin, ein mit Tumorsuppressorfunktionen assoziiertes Protein, das über Interaktionen mit FNIP1/2 sowie die Regulation der AMPK–mTORC1- und Rag-GTPase-Signalwege Nährstoffsensorik, lysosomale Signalübertragung und den zellulären Stoffwechsel koordiniert. Folliculin trägt zur Kontrolle der Autophagie, zur mitochondrialen Homöostase und zu Transkriptionsprogrammen im Zusammenhang mit TFEB/TFE3 bei und beeinflusst damit die Lysosomenbiogenese und Stressantworten. Loss-of-Function-Varianten in FLCN sind an das Birt–Hogg–Dubé-Syndrom beteiligt und mit einer Prädisposition für Nierentumoren sowie der Bildung pulmonaler Zysten assoziiert, wodurch FLCN einen zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung von Genotyp-Phänotyp-Mechanismen darstellt. Die experimentelle Modulation von Folliculin unterstützt Untersuchungen zur Energiehomöostase, zur Kontrolle des Zellwachstums und zur epithelialen Differenzierung, die für die Krankheitsbiologie relevant sind.
folliculin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FLCN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FLCN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FLCN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FLCN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.