Plasmide CRISPR d'Activation (h) FNDC1: sc-413674-ACT

FNDC1 (fibronectin type III domain containing 1) code une protéine cytoplasmique caractérisée par des motifs de type fibronectine III, impliquée dans la régulation de l’adhésion cellulaire, de l’organisation du cytosquelette et de la transduction du signal. Des associations fonctionnelles rapportées relient FNDC1 à des processus tels que la migration et la prolifération via des voies sensibles aux facteurs de croissance, notamment les voies de signalisation PI3K/AKT et MAPK, ainsi qu’à la modulation des réponses cellulaires au stress. Une expression altérée de FNDC1 a été observée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilisation comme cible de recherche pour étudier le remodelage des voies de signalisation et la plasticité phénotypique. L’étude expérimentale de FNDC1 peut aider à définir comment les signaux extracellulaires sont intégrés aux programmes transcriptionnels et cytosquelettiques dans les cellules humaines.

FNDC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FNDC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FNDC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FNDC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FNDC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FNDC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FNDC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FNDC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FNDC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FNDC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.