Plasmide CRISPR d'Activation (h) Flt-4: sc-400684-ACT

FLT4 code pour le récepteur tyrosine kinase humain Flt-4 (VEGFR-3), un nœud de signalisation majeur dans les cellules endothéliales lymphatiques, qui se lie au VEGF‑C et au VEGF‑D afin de réguler la lymphangiogenèse, le remodelage vasculaire et la survie endothéliale. Après la liaison du ligand, Flt-4 active des voies en aval, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ–PKC, pour coordonner les réponses de prolifération, de migration et de perméabilité. Une signalisation FLT4 dérégulée est impliquée dans un développement lymphatique anormal et dans l’homéostasie des fluides tissulaires, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la lymphangiogenèse associée aux tumeurs et de la dissémination métastatique. En tant que récepteur membranaire dont les effets de signalisation dépendent du contexte, FLT4 constitue une cible pertinente pour analyser les dynamiques ligand–récepteur, le trafic du récepteur et les interactions entre voies de signalisation en biologie vasculaire.

Flt-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FLT4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Flt-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FLT4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FLT4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Flt-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FLT4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Flt-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Flt-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de FLT4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.