Plásmido CRISPR de Activación (h) Flt-1/VEGFR1: sc-400330-ACT

FLT1 codifica Flt-1/VEGFR1, un receptor tirosina cinasa de alta afinidad para VEGF-A, VEGF-B y el factor de crecimiento placentario, que modula la disponibilidad del ligando y la salida de señalización en los linajes endotelial y mieloide. VEGFR1 participa en la angiogénesis, la permeabilidad vascular, la migración endotelial y el reclutamiento de células inflamatorias a través de vías que incluyen PI3K–AKT, MAPK/ERK y señalización dependiente de PLCγ. Tanto las isoformas de VEGFR1 unidas a membrana como las solubles configuran los gradientes de VEGF y la maduración vascular, vinculando la regulación de FLT1 con respuestas a la hipoxia y la remodelación tisular. La señalización desregulada de FLT1/VEGFR1 se ha asociado con neovascularización patológica y disfunción vascular observadas en la biología del cáncer, en contextos isquémicos y en enfermedades inflamatorias, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en la investigación vascular y del microambiente.

Flt-1/VEGFR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FLT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Flt-1/VEGFR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FLT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FLT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Flt-1/VEGFR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FLT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Flt-1/VEGFR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Flt-1/VEGFR1 en células tumorales con expresión de FLT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.