Plásmido Doble Nickase (m) Flotillin-1: sc-420381-NIC

Flot1 codifica la flotilina-1, una proteína andamiaje asociada a balsas lipídicas, enriquecida en la membrana plasmática y en compartimentos endosomales, donde organiza microdominios de membrana. La flotilina-1 participa en la endocitosis independiente de clatrina, el tráfico vesicular y la transducción de señales al coordinar la agrupación de receptores y las interacciones con el citoesqueleto, influyendo en vías como EGFR/MAPK y PI3K/AKT. En células de ratón, Flot1 contribuye a la señalización inmunitaria, a la organización de membranas neuronales y gliales y a la regulación de la adhesión y migración celular mediante la clasificación de proteínas dependiente de balsas. Se ha asociado la abundancia o localización alteradas de la flotilina-1 con fenotipos de tráfico de membrana y señalización desregulados, relevantes para procesos oncogénicos, la neurobiología y modelos de enfermedades inflamatorias.

Flotillin-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Flot1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Flot1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Flot1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Flot1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.