Plásmido CRISPR de Activación (h) Flk-1/KDR/VEGFR2: sc-400118-ACT

KDR codifica el receptor tirosina quinasa VEGFR2 (Flk-1/KDR), un nodo principal de señalización para las respuestas del endotelio vascular impulsadas por VEGF. Tras la unión del ligando y la autofosforilación del receptor, VEGFR2 activa las cascadas PI3K–AKT, PLCγ–PKC–MAPK/ERK, Src/FAK y vías vinculadas a eNOS, que coordinan la proliferación, migración, supervivencia y permeabilidad endoteliales. Esta vía es central en los programas angiogénicos y linfangiogénicos y se estudia con frecuencia en contextos de neovascularización tumoral, remodelado asociado a isquemia y disfunción vascular inflamatoria. La señalización desregulada de KDR se ha asociado con alteraciones de la integridad microvascular e interacciones endotelio–pericito aberrantes, relevantes para la biología de enfermedades cardiovasculares y oculares.

Flk-1/KDR/VEGFR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KDR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Flk-1/KDR/VEGFR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KDR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KDR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Flk-1/KDR/VEGFR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KDR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Flk-1/KDR/VEGFR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Flk-1/KDR/VEGFR2 en células tumorales con expresión de KDR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.