FLIP_S/L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400400-ACT

CFLARは、細胞性FLICE阻害タンパク質（FLIP）をコードする遺伝子であり、死受容体によって開始されるアポトーシスおよびネクロプトーシスを調節するFLIP_SおよびFLIP_Lのアイソフォームとして発現します。FLIPは、死誘導シグナル複合体（DISC）においてFADDおよびプロカスパーゼ8と相互作用することでカスパーゼ8の活性化を微調整し、その結果、TNF、Fas/CD95、TRAIL経路の出力や、下流のNF-κBシグナル伝達にも影響を及ぼします。この調節的役割を通じて、CFLARは細胞の生存・死の意思決定、炎症性シグナル、免疫恒常性に関与します。CFLAR/FLIPの発現異常は、アポトーシス抵抗性の破綻や免疫関連病態と関連づけられており、腫瘍細胞の生存、感染応答、サイトカイン駆動性ストレスシグナルに関する研究で共通の注目点となっています。

FLIPS/L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CFLARの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FLIPS/L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CFLAR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCFLAR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FLIPS/Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCFLAR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFLIPS/L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCFLAR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFLIPS/L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。