FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400644

概要

FLGはフィラグリンをコードしており、フィラグリンは表皮分化における主要タンパク質の一つです。フィラグリンはケラトヒアリン顆粒内でプロフィラグリンとして産生され、終末期の角化細胞成熟過程でフィラグリン反復配列へとプロセシングされ、ケラチン中間径フィラメントを凝集させます。フィラグリンの分解産物は天然保湿因子（NMF）の構成成分となり、角質層の保湿、pH恒常性、ならびにバリア機能の維持に寄与します。これらの機能を通じて、FLGはコーニファイドエンベロープ形成、脂質の組織化、そしてバリアストレスに関連する炎症シグナル伝達とも関わります。機能喪失変異や発現低下は皮膚バリア障害の表現型と関連し、アトピー性皮膚炎や尋常性魚鱗癬のモデルで広く研究されています。

FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFLG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FLG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FLGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FLG/Filaggrinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FLG/Filaggrinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FLG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FLG/Filaggrinの機能に不可欠なFLGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FLGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FLG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FLG/Filaggrin HDRプラスミド（h）および FLG/Filaggrin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFLGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFLG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。