FLAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406725

概要

FLAD1はフラビンアデニンジヌクレオチド合成酵素1（FAD synthetase 1）をコードしており、FMNをアデニル化してFADを生成する二機能性酵素です。FADは、多くのミトコンドリアおよび細胞質のフラボタンパク質に必要な主要な酸化還元補因子です。FLAD1は細胞内のFAD利用可能量を制御することで、酸化的代謝、電子移動反応、脂肪酸β酸化、さらに広範なミトコンドリア恒常性を支え、微量栄養素由来のリボフラビン代謝をエネルギー産生と酸化還元バランスに結び付けています。FAD合成が乱れると、フラボタンパク質依存性経路が障害され、活性酸素種（ROS）の制御が変化し、バイオエネルギー産生能が損なわれる可能性があります。ヒトの遺伝学的・機能的エビデンスから、FLAD1機能障害はフラビン代謝の先天代謝異常やミトコンドリア病様の表現型と関連することが示されており、代謝ストレスやミトコンドリア生物学の研究において重要です。

FLAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFLAD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FLAD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FLAD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FLAD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FLAD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FLAD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FLAD1の機能に不可欠なFLAD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FLAD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FLAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFLAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FLAD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FLAD1 HDRプラスミド（h）および FLAD1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFLAD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFLAD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。