FKBP8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403075-ACT

FKBP8 (FK506-Bindungsprotein 8), auch als FKBP38 bekannt, ist ein mit Mitochondrien und endoplasmatischem Retikulum (ER) assoziiertes Immunophilin, das als Peptidyl‑Prolyl‑cis‑trans‑Isomerase sowie als Scaffold-Faktor zur Koordination von Proteinfaltung und Signalübertragung fungiert. In menschlichen Zellen moduliert FKBP8 die Apoptose und die mitochondriale Homöostase über Interaktionen mit Proteinen der BCL2-Familie und ist an Proteostasewegen beteiligt, einschließlich Chaperon-Netzwerken und selektivem Proteinabbau. Es wurde mit der Regulation der mTOR-Signalgebung und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, die unter metabolischem oder proteotoxischem Stress Überlebensentscheidungen beeinflussen. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von FKBP8 wurde in Zusammenhängen untersucht, die eine abnorme Kontrolle der Apoptose, mitochondriale Dysfunktion und veränderte stressadaptive Signalwege betreffen, was für die Krebsbiologie und die Neurodegenerationsforschung relevant ist.

FKBP8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FKBP8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FKBP8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FKBP8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FKBP8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FKBP8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FKBP8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FKBP8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FKBP8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FKBP8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.