Plasmide CRISPR d'Activation (h) FKBP12.6: sc-401445-ACT

FKBP1B code pour FKBP12.6, une immunophiline isomérase peptidyl‑prolyl cis–trans qui se lie aux canaux intracellulaires de libération du calcium et module le couplage excitation–contraction. FKBP12.6 interagit avec les récepteurs à la ryanodine, en particulier RyR2, en stabilisant le fonctionnement du canal et en contribuant à l’homéostasie du calcium dans les cardiomyocytes et d’autres cellules excitables. Grâce à ces interactions, FKBP12.6 influence des cascades de signalisation dépendantes du Ca2+ qui régulent la fonction mitochondriale, les réponses au stress oxydatif et des programmes transcriptionnels liés au remodelage cellulaire. Une expression dérégulée de FKBP1B ou une altération du couplage FKBP12.6–RyR a été associée à des perturbations de la gestion du calcium observées dans des contextes de recherche sur les maladies cardiovasculaires et neuromusculaires.

FKBP12.6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FKBP1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FKBP12.6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FKBP1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FKBP1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FKBP12.6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FKBP1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FKBP12.6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FKBP12.6 dans les cellules tumorales présentant une expression de FKBP1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.