FKBP10 Double Nickase Plasmid (m): sc-420366-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FKBP10 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FKBP10 Double-Nickase-Plasmid (m) und FKBP10 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Fkbp10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FKBP10: sc-390538
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FKBP10 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKBP10 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fkbp10 kodiert FKBP10, eine im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte FK506-bindende Peptidyl-Prolyl-cis–trans-Isomerase, die während der Faltung und Reifung von Prokollagen als kollagenspezifisches Chaperon fungiert. FKBP10 unterstützt den Aufbau der extrazellulären Matrix, indem es die Stabilisierung der Kollagen-Dreifachhelix koordiniert und die korrekte Sekretion erleichtert, und ist in ER-Proteostase-Netzwerke eingebunden, zu denen chaperon-unterstützte Faltung und Qualitätskontrolle gehören. In Mausgeweben, die reich an Bindegewebsmatrix sind, beeinflusst die FKBP10-Aktivität die Kollagenbiosynthese, die Fibrillenorganisation und die daraus resultierenden mechanischen Eigenschaften des Gewebes. Eine Fehlregulation der FKBP10-abhängigen Kollagenverarbeitung ist mit erblichen Bindegewebs- und Skelettphänotypen verknüpft, wodurch Fkbp10 ein relevantes Ziel für die Untersuchung matrixgetriebener Pathomechanismen ist.
FKBP10 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Fkbp10-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Fkbp10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Fkbp10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Fkbp10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.