FIP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413438

概要

FIP1L1は、前駆体mRNA（pre-mRNA）の3′末端処理部位を規定し、poly(A)テール付加を協調させる切断・ポリアデニル化特異性因子（CPSF）複合体の中核サブユニットをコードしている。ポリアデニル化因子やRNAポリメラーゼIIに共役したプロセシング装置との相互作用を介して、FIP1L1は転写産物の成熟、安定性、および制御された遺伝子発現プログラムに寄与する。FIP1L1の機能異常はRNAプロセシングの破綻と関連し、特に一部の骨髄系腫瘍で観察されるFIP1L1–PDGFRA再構成を通じて、血液悪性腫瘍の病態に関与することが示唆されている。そのためFIP1L1は、mRNAの3′末端形成と細胞増殖・分化・ストレス応答性の転写出力を結び付ける経路において、しばしば研究対象となっている。

FIP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFIP1L1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FIP1L1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FIP1L1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FIP1L1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FIP1L1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FIP1L1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FIP1L1の機能に不可欠なFIP1L1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FIP1L1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FIP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFIP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FIP1L1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FIP1L1 HDRプラスミド（h）および FIP1L1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFIP1L1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFIP1L1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。