FIP1L1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413438

Descripción general

FIP1L1 codifica una subunidad central del complejo factor de especificidad de corte y poliadenilación (CPSF), que ayuda a definir los sitios de procesamiento del extremo 3′ en los pre-ARNm y coordina la adición de la cola poli(A). A través de interacciones con factores de poliadenilación y con la maquinaria de procesamiento acoplada a la ARN polimerasa II, FIP1L1 contribuye a la maduración de los transcritos, su estabilidad y programas regulados de expresión génica. La alteración de la función de FIP1L1 es relevante para la desregulación del procesamiento de ARN y se ha implicado en la biología de neoplasias hematológicas, en particular mediante el reordenamiento FIP1L1–PDGFRA observado en ciertos trastornos mieloides. Como resultado, FIP1L1 se estudia con frecuencia en vías que vinculan la formación del extremo 3′ del ARNm con la proliferación celular, la diferenciación y las salidas transcripcionales sensibles al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FIP1L1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FIP1L1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FIP1L1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FIP1L1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FIP1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FIP1L1 para la investigación de la señalización de FIP1L1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FIP1L1 críticos para la función de FIP1L1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FIP1L1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FIP1L1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FIP1L1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FIP1L1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FIP1L1 (h) y el plásmido HDR FIP1L1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FIP1L1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FIP1L1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.