Filamin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402358

概要

FLNCはフィラミン2（filamin 2）をコードしており、F-アクチンを架橋して束ねるとともに、細胞骨格を膜受容体やシグナル伝達複合体へ連結する、大型のアクチン結合性足場タンパク質です。フィラミン2は、アクチンネットワークを編成し、インテグリンおよびそれに関連するフォーカルアドヒージョン（接着斑）機構と相互作用することで、メカノトランスダクション、細胞形状、接着ダイナミクスを統合的に調節します。横紋筋では、FLNCがサルコメアおよび筋原線維の構造的完全性を支え、力の伝達やストレス応答にも寄与します。FLNCの遺伝学的な異常は心筋症や筋原線維性ミオパチーと関連することが知られており、細胞骨格リモデリングや筋疾患の機序を研究するうえで重要な標的です。

Filamin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFLNC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FLNC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FLNCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Filamin 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Filamin 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FLNC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Filamin 2の機能に不可欠なFLNCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FLNCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Filamin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFilamin 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FLNC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Filamin 2 HDRプラスミド（h）および Filamin 2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFLNCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFLNC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。