Plásmido CRISPR de Activación (h) Fibulin-3: sc-401978-ACT

EFEMP1 codifica fibulina-3, una glucoproteína secretada de la matriz extracelular que se asocia con las fibras elásticas y con componentes de la membrana basal para regular la organización de la matriz, la adhesión célula–matriz y la remodelación tisular. La fibulina-3 influye en redes de señalización vinculadas a la homeostasis de la matriz extracelular, incluida la modulación de la actividad de proteasas y la interacción con vías como TGF-β y VEGF, que determinan la angiogénesis, la fibrosis y las respuestas al estrés. Se ha informado de una expresión alterada de EFEMP1 en contextos relacionados con la integridad de la retina y la degeneración macular, así como con la remodelación del estroma asociada a tumores, lo que respalda su relevancia en estudios sobre la regulación del microambiente. Estas propiedades hacen de EFEMP1 una diana útil para investigar la dinámica de la matriz extracelular, las interacciones epitelio–mesénquima y la proteostasis asociada a la secreción.

Fibulin-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EFEMP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fibulin-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EFEMP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EFEMP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fibulin-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EFEMP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fibulin-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fibulin-3 en células tumorales con expresión de EFEMP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.