Fibulin-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401754-NIC

FBLN1 codifica la fibulina-1, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che si associa alle fibre elastiche, ai componenti della membrana basale e a numerosi proteoglicani, influenzando l’organizzazione della matrice e la meccanica dei tessuti. La fibulina-1 partecipa ai processi di adesione cellula–matrice e di rimodellamento che si intersecano con la segnalazione mediata dalle integrine, i programmi di riparazione delle ferite e l’omeostasi della matrice extracellulare vascolare. Alterazioni dell’espressione di FBLN1 e della deposizione di matrice sono state riportate in contesti di fibrosi e di rimodellamento cardiovascolare, e un’architettura della matrice extracellulare deregolata è implicata anche nella biologia del microambiente tumorale. Di conseguenza, FBLN1 viene spesso studiato come nodo strutturale e regolatorio che collega l’assemblaggio della matrice extracellulare alla migrazione cellulare, alla proliferazione e alla meccanotrasduzione.

Fibulin-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FBLN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FBLN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FBLN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FBLN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.