Plasmide Double Nickase (h) Fibronectin: sc-400082-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Fibronectin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Fibronectin Double Nickase (h) et le plasmide Fibronectin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FN1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Fibronectin Antibody (EP5): sc-8422
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Fibronectin | sc-400082-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Fibronectin | sc-400082-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FN1 code la fibronectine, une glycoprotéine de la matrice extracellulaire de haut poids moléculaire qui s’assemble en réseaux fibrillaires et fournit des sites de liaison aux intégrines afin de coordonner l’adhérence, l’étalement et la migration cellulaires. La fibronectine régule les adhésions focales et la dynamique du cytosquelette, et s’articule avec des voies de remodelage de la MEC impliquant les intégrines, la signalisation FAK/Src et les GTPases de la famille Rho, contribuant ainsi à façonner la mécanotransduction et l’architecture tissulaire. Par ses rôles dans la réparation des plaies, l’angiogenèse et les interactions épithélio-mésenchymateuses, FN1 est fréquemment étudié dans des contextes de fibrose, de stroma associé aux tumeurs et de remodelage tissulaire inflammatoire. Des modifications du dépôt de fibronectine et de l’équilibre des isoformes d’épissage sont associées à des changements de l’invasion cellulaire, du trafic des cellules immunitaires et de la rigidité matricielle spécifique d’organe dans de multiples modèles de maladie.
Fibronectin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FN1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.