Plasmide Double Nickase (m) Fibrinogen γ: sc-430271-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Fibrinogen γ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Fibrinogen γ Double Nickase (m) et le plasmide Fibrinogen γ Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Fgg. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Fibrinogen γ Antibody (D-6): sc-133226
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Fibrinogen γ | sc-430271-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Fibrinogen γ | sc-430271-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fgg code la chaîne gamma du fibrinogène, un composant central de l’hexamère de fibrinogène qui est converti par protéolyse en fibrine lors des étapes terminales de la cascade de coagulation. Le fibrinogène γ contribue à la polymérisation de la fibrine, à l’architecture du caillot et aux interactions avec les récepteurs des plaquettes et des leucocytes, reliant l’hémostase aux signaux inflammatoires. Chez la souris, la perturbation de Fgg est utilisée pour étudier la formation de fibrine induite par la thrombine, le remodelage de la matrice extracellulaire lors de la réparation des plaies et les interactions entre les voies de coagulation et les réponses immunitaires innées. Une altération de la fonction ou de l’expression du fibrinogène γ est pertinente dans des modèles expérimentaux d’hémorragie ou de thrombose, de lésion vasculaire et de dommages tissulaires inflammatoires, où les dépôts de fibrine influencent la pathologie.
Fibrinogen γ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fgg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fgg. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fgg. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fgg.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.