Plasmide CRISPR d'Activation (h) FHOD3: sc-405102-ACT

FHOD3 (formin homology 2 domain containing 3) code une formine nucléatrice d’actine qui coordonne l’allongement des filaments et l’organisation du cytosquelette. Dans le muscle strié, FHOD3 contribue à l’intégrité des sarcomères et à la myofibrillogenèse, en reliant la signalisation des GTPases de la famille Rho au remodelage de l’actine et au maintien de l’appareil contractile. Une expression altérée de FHOD3 ou certaines variations ont été associées à des défauts structurels des cardiomyocytes et sont étudiées dans le contexte des cardiomyopathies et, plus largement, des dérégulations du cytosquelette. En tant que régulateur de la dynamique de l’actine, FHOD3 est pertinent pour l’étude de la morphologie cellulaire, de la mécanotransduction et de la maturation des cellules musculaires.

FHOD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FHOD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FHOD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FHOD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FHOD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FHOD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FHOD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FHOD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FHOD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de FHOD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.