Plásmido CRISPR de Activación (h) FGF-BP: sc-404956-ACT

FGFBP1 codifica la proteína 1 de unión al factor de crecimiento de fibroblastos (FGF-BP), un transportador secretado que moviliza los FGF unidos a heparina desde la matriz extracelular y aumenta la biodisponibilidad de la señalización de FGF. Al potenciar las interacciones ligando–receptor, FGF-BP puede influir en procesos vinculados a MAPK/ERK y PI3K/AKT, como la proliferación celular, la migración y la remodelación angiogénica en microambientes tisulares. Se han descrito alteraciones en la expresión de FGFBP1 en múltiples contextos patológicos y con frecuencia se estudia como modulador de fenotipos impulsados por factores de crecimiento, de la dinámica de la matriz extracelular y de la comunicación estroma–epitelio. Estas propiedades hacen de FGFBP1 un nodo útil para estudios mecanísticos sobre la regulación de la vía FGF y las contribuciones del proteoma secretado a los cambios en el estado celular.

FGF-BP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FGFBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FGF-BP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FGFBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FGFBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FGF-BP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FGFBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FGF-BP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FGF-BP en células tumorales con expresión de FGFBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.