Plásmido Doble Nickase (h) FGF-8: sc-403127-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FGF-8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FGF-8 (h) y el plásmido de doble nickasa FGF-8 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FGF8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FGF-8 Anticuerpo (2A10): sc-293479
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FGF-8 | sc-403127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FGF-8 | sc-403127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FGF8 codifica el factor de crecimiento de fibroblastos 8 (FGF-8), un ligando de señalización secretado que se une a los FGFR para activar las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ, las cuales coordinan la proliferación, supervivencia y migración celulares, así como la especificación de linaje. Es un morfógeno clave durante el patrón embrionario, incluido el desarrollo del mesencéfalo–rombencéfalo, la morfogénesis craneofacial y el crecimiento del brote de las extremidades, y también contribuye a la homeostasis tisular mediante señalización paracrina. La expresión desregulada de FGF8 o la hiperactivación de la vía FGFR se han relacionado con programas de desarrollo alterados y redes de señalización oncogénica en múltiples contextos tumorales. Dado que FGF-8 se cruza con la señalización de receptores tirosina cinasa y con programas transcripcionales aguas abajo, se estudia con frecuencia en modelos de diferenciación, dinámicas epitelio–mesénquima y señales de crecimiento impulsadas por el microambiente.
FGF-8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FGF8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FGF8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FGF8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FGF8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.